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• 1，給藥濃度乘以多糖提取率就是最后給動物灌喂的濃度
• 2，請教 實驗動物中高中低劑量如何確定的及依據(jù)
• 3，抗生素單拷貝整合到染色體后用多大濃度篩選
• 4，請問用HPLC測動物血漿和內(nèi)臟內(nèi)藥物濃度之前該怎樣處理
• 5，不同給藥組動物指標比較用什么方法
• 6，動物試驗給藥劑量怎么定
• 7，給藥劑量臨床常用量動物等效面積系數(shù)培養(yǎng)基內(nèi)血清稀釋度中培養(yǎng)

1，給藥濃度乘以多糖提取率就是最后給動物灌喂的濃度

可以私聊我~

農(nóng)藥的比例是5%。糖比例是25%。??

2，請教 實驗動物中高中低劑量如何確定的及依據(jù)

實驗動物中高中低劑量如何確定的及依據(jù)1、先用少量小鼠粗略的摸索山毒劑量或致死劑量，然后用中毒劑量或致死劑量的若干分之作為應用劑量，一般可取1／10-1／5。2、確定劑量后，如第一次實驗的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn)(體重下降、精神不振、活動減少或其它癥狀)，可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應減少劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件：時，最好同時用兒個劑量做實驗，以便迅速獲得關于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度毫無規(guī)律時，則更應慎重分析。3、用人動物進行實驗時，開始的劑量可采用給鼠類劑量的十五分之一至二分之一，以后可根據(jù)動物的反應調(diào)整劑量。4、確定動物的給藥劑量時，要考慮給藥動物的年齡大小和體質(zhì)強弱?！阏f，確定的給藥劑量是指成年動物的，如果幼小動物，劑量應減小。服量為100，灌胃量應為100-200，皮下注射量為30—50，肌肉注射量為25—30，靜脈注射量為25。二、實驗動物給藥量的計算方法動物實驗所用的藥物劑量一般按毫克／公斤體重或克／公斤體重計算，應用時須從已知藥液的濃度換算十相當于每公斤體重應注射的藥液量(毫升數(shù))，以便給藥。三、人與動物的給藥量換算方法人與動物對同藥物的耐受性相差很大。一般說來，動物的耐受性比人大，也就是單位體重動物的用藥量比人要人，近幾年來新藥藥效研究中多以下列公式計算：D2=D1×K2／K1×W1/W2D為藥物劑量，K為常數(shù)，W為動物體重(kg)(1指人；2指動物。人及不同種類動物的K值不同，人1．6、猴11．2、兔10．1、大鼠9．1、小鼠9．1、鼠9．8、貓9．8。如一例體重為70kg的人，某藥劑量為20ug．kg-1．D-1，—只5kg重的猴為53．6 ug．kg-1．D-1，一只10kg重的大為40．4ug．kg-1．D-1，而一只20g重的小鼠為260．6 ug．kg-1．D-1(見表三)人用劑量與不同種類動物間劑量的關系。

3，抗生素單拷貝整合到染色體后用多大濃度篩選

可以做150g/ml、 200g/ml、300g/ml三個濃度進行篩選?！　榉治鲛D(zhuǎn)化的功能和表達需要DNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至宿主細胞染色體.外源基因進入細胞后,部分能夠通過細胞質(zhì)進入細胞核內(nèi),根據(jù)細胞類型,至多80%的進入 核內(nèi)的外源DNA得到瞬時表達.極少數(shù)情況下,進入細胞的外源DNA通過系列非同源性分子間重組核連接,形成巨大的***結(jié)構(gòu)最終整合進細胞染色體.細胞 基因組自由部分表達,所以整合并不一定意味著表達,只有整合到表達區(qū)的基因才會表達,而且整合到不同的染色體區(qū)段的外源基因的表達的量也是不同的.由于攝 取、整合、表達外源基因是小概率事件,通常根據(jù)新表型篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體?！　∫话闱闆r下這種新表型由共轉(zhuǎn)染的編碼抗生素抗性基因提供.細菌Tn5轉(zhuǎn)座子序列 （neo抗性基因）攜帶的氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶可以將G418轉(zhuǎn)變成無毒形式.G418是一種氨基糖類抗生素,其結(jié)構(gòu)與新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,它 通過影響80S核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細胞都有毒性,包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞,也包括原生動物和蠕蟲.是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用 的選擇試劑.當neo基因被整合進真核細胞基因組合適的地方后,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效 表達,使細胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長.G418的這一選擇特性,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以廣泛 應用.在進行轉(zhuǎn)染時細胞膜受到影響,抗生素可能對細胞產(chǎn)生較大影響,加上G418有殺菌作用,所以有人主張轉(zhuǎn)讓時不加其它抗生素.其實G418本身有很好 的殺菌效果,在用G418進行篩選的過程中很少會發(fā)生污染.但有一點,在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時所 用培養(yǎng)基中最好不加任何抗生素.可能是脂質(zhì)體對細胞膜有影響,可能此時加抗生素對細胞損傷較大.因為慶大霉素、鏈霉素、G418均是氨基糖甙 類藥物,其藥理作用完全一樣.所以沒有必要再用,而且由于另外抗生素的添加實際增加氨基糖甙類藥物的濃度,劑量有誤差,不利于各實驗室之間的交流,在實際 操作中,培養(yǎng)液中有抗生素對細胞培養(yǎng)與篩選影響不大.Protocal1.G418的配制： 取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中,加蒸餾水至10ml,過濾消毒,4度保存.2.細胞培養(yǎng)：取待測培養(yǎng)細胞,制備成細胞懸液,按等量接種入多孔培養(yǎng)板中,培養(yǎng)6小時左右開始加藥.3.制備篩選培養(yǎng)基：在100g/ml～1000g/ml范圍內(nèi)確定幾個梯度,比如先做個100g/ml、400g/ml、800g /ml、1000g/ml,按梯度濃度用培養(yǎng)基稀釋G418制成篩選培養(yǎng)基.4.加G418篩選： 吸除培養(yǎng)孔中培養(yǎng)基,PBS洗滌一次,每孔中加入不同濃度的篩選培養(yǎng)基.5.換液：根據(jù)培養(yǎng)基的顏色和細胞生長情況,每3~5天更換一次篩選培養(yǎng)基.方法同4.6.確定最佳篩選濃度：在篩選10～14天內(nèi)能夠殺死所有細胞的最小G418濃度即為最佳篩選濃度.在第一輪就篩選出最佳G418濃度的可能性不 大,最有可能的是出現(xiàn)這種情況：用某一濃度G418的量在篩選14天后還不能殺死細胞,而用下一個梯度的G418的量在10天前就看不到活細胞了.假如是 400g/ml不能殺死細胞,而800g/ml在第5天就把所有細胞都殺死了,則可以再用500g/ml、600g/ml、700g/ml進一 步篩選,以確定最佳篩選濃度!心得：由于特性明確的細胞系G418的最佳用量還是比較穩(wěn)定的,所以有時候不需要在這么大范圍內(nèi)進行篩選。

4，請問用HPLC測動物血漿和內(nèi)臟內(nèi)藥物濃度之前該怎樣處理

血液抗凝后離心,去上層血漿,再通過液-液萃取,沉淀蛋白或者固相萃取,(內(nèi)臟要低溫冷凍,然后勻漿,再提取,)然后通過HPLC測定,如果濃度很低,就要用液質(zhì)聯(lián)用.

同意樓上的，但LZ應當先建立方法學才是??！不建立方法學怎么可以就測樣呢？

5，不同給藥組動物指標比較用什么方法

不同給藥組動物指標比較用什么方法如果是同一組患者治療前后某項指標的變化是否存在顯著差異，通?？梢圆捎门鋵颖綯檢驗的方式進行考察。如果是兩組患者，則需要具體分析了：（1）如果你所謂的兩組患者一組是病人，另一組是作為參照組（或者控制組，通常只是服用安慰劑）來處理的，那么指標的變化可以通過獨立雙樣本T檢驗的方法處理；（2）如果兩組患者并非這樣處理的，而是兩組病情程度不同的病人，那么由于兩組患者的基礎不同，建議分成兩組，分別采用配對樣本T檢驗處理；（3）如果兩組患者的基礎一致（如病情程度類似，年齡、性別等分布類似），只是采用了兩種不同治療方案，則可以采用獨立雙樣本T檢驗處理。

水分0.2-0.3 脂肪93.8 酸值 1.1-2.2 皂物價《200 碘值《47 融化脂肪應透明，外部脂肪熔點48

6，動物試驗給藥劑量怎么定

ic50是半抑制率，意思是抑制率50%的時候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標作圖，然后得到50%抑制率時候的藥品濃度，就是ic50。要點：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點線圖即可!觀察一種藥物對實驗動物的作用時，一個重要的問題就是給動物用多大的劑量較合適。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動物中毒致死?？梢园聪率龇椒ù_定劑量： 1. 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量

觀察一種藥物對實驗動物的作用時，一個重要的問題就是給動物用多大的劑量較合適。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動物中毒致死。可以按下述方法確定劑量：1.先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一作為應用劑量，一般可取1/10～1/5。2.植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。3.化學藥品可參考化學結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是化學結(jié)構(gòu)和作用都相似的劑量。4.確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動物也沒有中毒的表現(xiàn),可以加大劑量再次實驗。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應降低劑量再次實驗。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強。所以有條件時，最好同時用幾個劑量作實驗，以便迅速獲得關于藥物作用的較完整的資料。如實驗結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強度之間毫無規(guī)律時，則更應慎重分析。5.用大動物進行實驗時，防止動物中毒死亡,開始的劑量可采用鼠類的1/15～1/2,以后可根據(jù)動物的反應調(diào)整劑量。6.確定動物給藥劑量時，要考慮給藥動物的年齡大小和體質(zhì)強弱。一般說確定的給藥劑量是指成年動物的，如是幼齡動物，劑量應減小。如以狗為例：6個月以上的狗給藥劑量為1份時，3～6個月的給1/2份，45～89日的給1/4份，20～44日的給1/8份，10～19日的給1/16份。7.確定動物給藥劑量時，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同。以口服量為100時，皮下注射量為30～50，肌肉注射量為20～30，靜脈注射量為25。二、人與動物的用藥量換算方法人與動物對同一藥物耐受性不同，一般動物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動物比人要高。必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例換算：人用藥量：1小鼠、大鼠：50～100兔、豚鼠：15～20狗、貓：5～10以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、皮下、腹腔注射，換算比例應適當減小些。

7，給藥劑量臨床常用量動物等效面積系數(shù)培養(yǎng)基內(nèi)血清稀釋度中培養(yǎng)

雖然我很聰明，但這么說真的難到我了

有限稀釋法是一種常用的克隆方法。 將需要再克隆的細胞株自培養(yǎng)孔內(nèi)吸出并作細胞計數(shù)，計出1mL的細胞數(shù)。 用HT培養(yǎng)液稀釋， 使細胞濃度為50～60個/mL，于96孔培養(yǎng)板中每孔加0.1mL(五六個細胞/孔)。接種2排，剩余細胞懸液用HT培養(yǎng)液作倍比稀釋，再接種2排，如此類推，直至使每孔含0.5～1個細胞。培養(yǎng)7～10d后，選擇單個克隆生長的陽性孔再一次進行克隆。一般需要如此重復3～5次，直至達100％陽性孔率時即可，以確?？贵w由單個克隆所產(chǎn)生。例如： 實驗細胞克隆化培養(yǎng)技術(shù)—有限稀釋法一、實驗目的： 1、掌握用有限稀釋法進行細胞克隆化培養(yǎng)技術(shù)； 2、學會細胞克隆形成的辯觀察技能； 3、配合抗體分泌細胞篩選技術(shù)，確定抗體分泌細胞。 二、實驗原理： 克隆化培養(yǎng)即單細胞培養(yǎng)技術(shù)，用有限稀釋法進行雜交瘤細胞克隆化培養(yǎng)，可以及時確定陽性雜交瘤細胞株，同時淘汰因發(fā)生染色體丟失或抗體的輕、重鏈基因分離而出現(xiàn)無抗體分泌陰性細胞株。 一般雜交瘤細胞需經(jīng)過52—3次反復克隆后，才能達到100%細胞陽性率。 該辦法亦適用于一般細胞培養(yǎng)中的細胞純化、突變細胞株的選擇，識別和分離。是細胞株的常用方法。 三、實驗材料： 雜交瘤細胞、25毫升培養(yǎng)瓶、96孔細胞培養(yǎng)板（天津有機玻璃廠）、移液管（1毫升、5毫升、10毫升）、彎頭滴管、倒置顯微鏡、CO2培養(yǎng)箱、白細胞計數(shù)板、計數(shù)器、蓋玻片、防水筆、RPMI-1640、小牛血清、青鏈霉素、10毫升刻度離心管，00橡膠塞，飼養(yǎng)細胞（3-6×105/ml、見腹腔細胞的制備）。 四、實驗步驟： 1、分裝了每孔0.1毫升腹腔細胞的96孔細胞培養(yǎng)板（可提前24小時準備就緒，置CO2培養(yǎng)箱中備用）； 2、自細胞培養(yǎng)瓶中收集長勢良好的雜交瘤細胞（亦可自24孔培養(yǎng)板孔中收集），制成懸液。3、按白細胞計數(shù)方法準確計得細胞懸液的細胞數(shù)，一般在105/毫升左右。 4、取3支10毫升刻度離心管排列在超凈工作臺試管架上，先用無血清培養(yǎng)基將細胞稀釋至103/毫升，再用含15%小牛血清的完全培養(yǎng)基稀釋到101/毫升細胞，即每0.1毫升1個細胞。 5、每孔0.1毫升細胞懸液。 6、置37℃5%CO2培養(yǎng)箱，4天后取出觀察，并在板蓋上打上標記，做好記錄并統(tǒng)計結(jié)果。 7、繼續(xù)培養(yǎng)時，則在第4-5天更換1/2培養(yǎng)基，約第7-9天可以收獲培養(yǎng)液上清用于檢測抗體。并重復檢測1-2次。 8、選擇單克隆生長孔，生長良好，陽性強者，轉(zhuǎn)移到24孔板再做克隆經(jīng)培養(yǎng)或擴大培養(yǎng)。 五、實驗結(jié)果： 實驗結(jié)果以總細胞孔（如96孔）中出現(xiàn)克隆孔統(tǒng)計出克隆百分率，并可進一步按單細胞孔、雙細胞孔、多細胞孔分別計算出百分率。 六、注意事項： 1、注意無菌操作，一旦發(fā)現(xiàn)污染（孔）必須及時處理； 2、計數(shù)細胞要求準確，稀釋量亦要準確，否則將造成一孔多細胞克隆或克隆百分離太低； 3、在計數(shù)克隆出現(xiàn)率之前，不宜更換培養(yǎng)液，也不宜強烈振動培養(yǎng)板； 4、做克隆化培養(yǎng)的小牛血清必須是優(yōu)質(zhì)血清； 5、若做克隆抗體檢測時，特別要保護細胞的生長狀況，防止細胞生長不良甚至丟失。 七、說明： 哺乳動物細胞通過分離、稀釋接種，培養(yǎng)在適宜于單細胞生長的培養(yǎng)液中，形成細胞克隆。運用這項技術(shù)可以制作細胞成活曲線，即在接種相同數(shù)量細胞的培養(yǎng)瓶中，加入不同濃度的化學藥品，或照以不同劑量的射線，觀察其對細胞的聽見害程度。由此可以在哺乳類細胞中進行誘變試驗及分離突變細胞。

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